Mikroskopische Färbemethoden
Botanik
W-3A-Färbung nach Wacker (Acridinrot-Acriflavin-Astrablau)
Benötigte Chemikalien :
Acridinrot 3B (C.I. 45000), Acriflavin (C.I. 46000), Astrablau FM (C.I. 48048), Ethanol 50%ig, Eisessig, Triethylphosphat (TEP), Xylol
Bemerkung :
Nach Mitteilung von Herrn Dr. Horst Wörmann und mit freundlicher Genehmigung von Herrn Robin J.G. Wacker
Literatur :
MK 95, 210 (2006)
Arbeitsablauf :
- Schnitte in Xylol entparaffinieren (dann Alkoholreihe bis zum 50%igen Ethanol)
- Acridinrotlösung 5 - 15 Min.
- Auswaschen mit Aqua dest. 15 Sek.
- Acriflavinlösung 5 - 15 Sek.
- Auswaschen mit Aqua dest. 15 Sek.
- Astrablaulösung 30 Sek. - 3 Min.
- Auswaschen mit Aqua dest. bis keine Farbstoffreste auf dem Objektträger verbleiben.
- Auf dem Objektträger haftende Wassertropfen abschütteln.
- Dehydrieren mit 3 Portionen Triethylphosphat (TEP) je 5 Sek.
- Aufhellen mit Xylol (2-3 Portionen) Mikroskopische Kontrolle.
- Falls die Färbung nicht zufriedenstellend gelungen ist -> das Xylol mittels Ethanolreihe (bis 50%ig) entfernen.
NACHFÄRBEN siehe Anmerkung.
- Einschluß in nicht fluoreszierendes synthetisches Eindeckmittel (z.b. Malinol, Eukitt, Entellan ...)
Ergebnis :
Zellwände blaugrün bis grün, verholzte Zellwände leuchtend rot. Zellwände der äußeren Hypodermis orangerot
Zellwände der innenliegenden Hypodermis tiefrot, Suberin und Cutin hellrosa, Zellkerne tiefrot
Anmerkung :
Ist die Rotfärbung zu schwach ausgefallen, muss die Färbezeit mit Acriflavin verkürzt oder bei Nachfärbung die Einwirkzeit von
Acridinrot verlängert werden.
Ist die Blau-Grün-Färbung zu schwach ausgefallen, die Färbezeit mit Astrablau verlängern.
Brilliantere Färbungen resultieren, wenn man die Astrablaulösung vor der Färbung mit einer kleinen Menge Acriflavinlösung versetzt.
Ansätze :
- Astrablaulösung: 2g Astrablau werden in 100ml Aqua dest. gelöst und mit 2ml Eisessig versetzt.
- Acridinrotlösung: 1g Acridinrot 3B werden in 100ml 50%igem Ethanol gelöst und mit 2ml Eisessig versetzt. Alternativ kann auch eine 1%ige wässrige Lösung von Acridinrot verwendet werden. Besser ist jedoch der angesäuerte alkoholische Ansatz.
- Acriflavinlösung: 1g Acriflavin werden in 100ml Aqua dest gelöst und mit 2ml Eisessig versetzt.
© by Armin Eisner