Mikroskopische Färbemethoden
Botanik
Vierfachfärbung nach Johannsen
Benötigte Chemikalien :
Safranin O (C.I.50240), Echtgrün FCF (C.I.42053), Methylviolett (C.I.42535), Orange G (C.I.16230),
Ethylenglycolmonomethylether (EGMME), Xylol, Ethanol, Natriumacetat, Formaldehydlösg. 37%ig, tert. Butanol,
Nelkenöl, Eisessig, Isopropanol
Bemerkung :
Ausschließlich für histologisch sehr stark differenzierte Objekte.
Die Färbung ist geeignet für pilzbefallenen Phanerogamen (Rostpilze, Brandpilze),
ferner für Flechten und parasitische Algen.
Literatur : 
BoMT S.132 / KryptPrakt S.137 / MK 33, 183 (1939/40)
Arbeitsablauf :
- Die entparaffinierten Schnitte kommen in 70%igen Ethanol.
- Färben in Safraninlösung 24-48 Std.
- Farblösung ablaufen lassen und gründlich in fließendem Leitungswasser spülen.
- Färben in der Methylviolettlösung 10-15 min.
- Apülen in Leitungswasser.
- Spüen in der Mischung A 15 sek.
- Färben in der Echtgrünlösung 10 min.
- Einige Male in Mischung B tauchen, bis die am Objektträger haftenden Reste der Farbstofflösg.
verschwunden sind.
- Färben in der Orange G-Lösung 5 min.
- Abspüen in der Mischung C.
- Nachspüen in der Mischung D.
- Spüen in Xylol, das mit einer Spur absoluten Isopropanols versetzt ist.
- Xylol, Harzeinschluß.
Ergebnis :
Chromosomen verholzte und verkorkte Zellwände rot, Nucleoli rot bis violett, Chromatin in Prophasen purpur,
Nucleoplasma grünlich bis farblos, Sklereiden leuchtend rot, Plastiden gelbgrün bis grün,
Stärkekörner tiefrotes Zentrum mit grüner oder oranger Schale, Spindelfasern purpurrot, Mittellamellen grün,
Pilzmycel lichtgrün, Cytoplasma orange, verholzte Zellwände rot, unverholzte Zellwände grünlich-orange,
kutinisierte Zellwände rötlich purpurn, Kollenchymzellen grün bis gelbgrün, Endodermis gelb bis orange,
Casparysche Streifen dunkelrot
Ansätze :
- Safraninlösung : 1g Safranin 0 wird in 50ml EGMME gelöst. Zu dieser Lösung werden
25ml 95%iger reiner Ethanol, 25ml Aqua dest., 1g Natriumacetat und 4ml 37%ige Formaldehydlösg. gegeben
- Methylviolettlösg. : 1g Methylviolett in 100ml Aqua dest. lösen.
- Echtgrünlösg. : Echtgrün gesättigt in 10ml Nelkenöl-EGMME-Gemisch (1:1).
Diese Lösung wird mit 30ml Ethanol 96%ig, 30ml tert. Butanol und 2-3 Tropfen Eisessig versetzt.
Diese Farblösung muß vor Gebrauch einige Tage alt sein.
- Orange G-Lösg. : Orange G gesättigt (ca. 0.5g) in 50ml Nelkenöl-EGMME-Gemisch (1:1).
Diese Lösung wird mit 25ml EGMME und 25ml 95%igen Ethanol versetzt.
- Mischung A : 33ml 95%iger Ethanol, 33ml tert. Butanol, 33ml EGMME
- Mischung B : 50ml 95%iger Ethanol, 50ml tert. Butanol, 0.25ml Eisessig
- Mischung C : 33ml Nelkenöl, 33ml 95%iger Ethanol, 33ml EGMME
- Mischung D : 33ml Nelkenöl, 33ml abs. Isopropanol, 33ml Xylol